王國榮 石上梅 張慶生

(中國藥品生物制品檢定所  北京100050)

世界衛(wèi)生組織藥品標準專家委員會于1975年提出了“有關化學對照品建立、保存及分發(fā)的指導原則”?！爸笇г瓌t”是由世界衛(wèi)生組織化學對照品合作中心(瑞典)起草，該中心負責提供國際化學對照品(icrs)，這些icrs主要用于國際藥典。提出“指導原則”的目的是為了促使不同國家和地區(qū)負責化學對照品的相關機構進行相互合作并協(xié)調一致起來。

由于下述原因，1982年對“指導原則”進行了修訂：

1．為滿足不同國家和區(qū)域藥典的各自要求，需建立世界衛(wèi)生組織icrs名單之外的化學對照品；

2．icrs的及時提供也有一定的難度；

3．世界衛(wèi)生組織化學對照品合作中心(瑞典)建立icrs這一工作需要由各個國家和區(qū)域的實驗室進行，“指導原則”可以確保各實驗室所做工作的完整、一致；

4．以適應藥品及分析方法的變化與進步。

采用化學對照品(crs)，其目的是為了按藥典及藥品質量標準要求，獲得準確的、可重現(xiàn)的分析結果。這些crs通常是由國家或地區(qū)藥品管理機構指定的實驗室進行制備和發(fā)放的；“指導原則”認為，不管是在鑒別試驗還是純度檢查，亦或是藥品的含量測定，crs的使用都應視為相應實驗整體的一部分。

crs的建立須依據分析結果及其評價報告，這些報告通常應由藥品管理當局審查批準。通常每一種crs的建立都有其特殊分析目的，由發(fā)放單位規(guī)定；如果被用作它途，則由使用者自己負責。每個crs的說明書要包括使用注意。

crs的制備應當遵從質量保證體系的要求，包括生產管理規(guī)范(gmp)和實驗室管理規(guī)范(glp)。

目前，該“指導原則”適用于一級化學對照品及二級化學對照品。一級化學對照品是指在特定的背景下具有適宜的質量、其量值無需再與另外的標準物質進行比對的crs(a designated primary chemical reference substance is one that is widely acknowledged to have the appropriate within a specified context，and whose value is accepted with out re comparison to another chemical substance)。

二級化學對照品是指經與一級化學對照品對照而得來的crs。對二級化學對照品進行確證的范圍及檢測的程度要小于一級化學對照品。除其它因素外。也可將其稱為“工作標準品”（a secondary chemical reference substance is a substance whose characteristics are assigned and/or calibrated by comparison with a primary chemical reference substance．the extent of characterization and testing of a secondary chemical reference substance may be less than a primary chemical substance．this definition may apply inter alia to some substances termed“working standards”)。

1  一級化學對照品指導原則

1．1 對于建立crs必要性的評估

crs的制備、標化、保存、分發(fā)是一項費時費力的工作，因此在建立某一種crs前，首先應對其必要性進行評價。目前在藥品質量標準中要求使用crs的方法有：紅外分光光度法：鑒別/定量；紫外分光光度法：定量；儀器或目視比色法：定量(可見光)；色譜法：鑒別/定量；采用其它分離技術的定量法(其分離效果取決于化合物在溶劑相中的分配比，且隨時間、實驗室不同而變化)；滴定法測定含量(采用重量而非化學計量關系的滴定)；旋光法定量；測定某些成分比例固定的樣品，如順、反異構體等。

1．2  crs原料的選擇

在純度合適的條件下，原料可以從1批或多批產品生產過程中選出。作為crs仍需進一步精制純化。

crs的純度要求取決于其用途。如，鑒別用crs無需很高的純度，因為少量雜質不會對測定產生明顯的影響。反之，含量測定用則要求高純度，通常以干燥品或無溶劑殘留計算的純度達到或超過99．5％是理想的含量測定用crs。在決定一種物質是否適合作為crs時，首要考慮的是其中的雜質對于采用的非特異性定量法有無影響。如果雜質的理化特性與crs的主成分相近，則不妨礙此crs的應用；相反，雜質有顯著的特異性，即使痕量，也不能采用。在提供原料時，隨原料還須附以下資料：檢測方法的全部資料(coa)，包括數據的建立、采用的平行測定的數目，相關的譜圖等；貯存條件及穩(wěn)定性(溫度、濕度等)；有關吸水性研究的結果或原料的吸潮性；加速穩(wěn)定性實驗結果；雜質的鑒別方法：雜質所占的百分比；現(xiàn)行的物質安全性數據手冊(updated material safety data sheet)中所列出的有關危害健康的資料。較為理想的方法是所發(fā)放的crs是由同一批樣品得來的。這就要求相互之間交換有關制備、來源、有效性、條件等資料。

1．3  crs的評價

某種化合物是否適合作為crs使用，是要由發(fā)放單位進行仔細評價的，要盡可能采用不同的分析方法以獲得可靠的數據來保證該化合物可以作為crs使用。對該化合物鑒定所采用的實驗內容，取決于該化合物用于何種目的，由各個獨立實驗室決定。

用作鑒別的crs(如紅外、色譜分析等)，如果純度允許，可以從生產過程中選一批質量好的化合物作為原料，可要求供應者做進一步的純化。crs至少應由一個實驗室采用藥典或相關標準中的方法進行檢驗。

用于檢查雜質—相關物質／揮發(fā)性物質的方法較多，根據方法的不同，對crs的要求也不同，如：薄層色譜法(tlc)，純度至少90％；高效液相(hplc)或氣相(gc)色譜法，純度則要求更高。如果是首批crs，則須做相應的化學、理化試驗，諸如質譜(ms)、核磁共振譜(nmr)、元素分析等。

如果采用比色法、hplc、gc或uv法進行含量測定，對crs的要求較嚴：至少3個或以上實驗室進行標化；采用不同的方法不同的儀器，其中包括藥典方法；如果采用非特異性含量測定方法(如比色法或uv法)，必須采用相對吸收度或相對反應率來檢查雜質百分比。如果是選擇性的定量方法，重要的是測定雜質的含量，在這種情況下，是盡可能采用適合的方法(法)來測定此crs。對于酸或堿性的樣品，采用酸堿滴定法測定較為簡單，也可采用其它化學計量反應方法來測定；某些情況下采用相溶解度法或差熱掃描法亦可。

水分、有機溶劑殘量、無機灰分及有機成分的總含量應達到100％。對大多數用于含量測定的crs，其含量可以實測值來表示。如以非特異性方法檢查crs，須測定水分、有機溶劑殘留量；對于選擇性的定量方法，除上述2項外，還須測定雜質含量。

當某種crs用作校準物質時，對其鑒定方法與含量測定用crs相似。需幾個實驗室采用不同方法不同儀器測定其純度是否合適。當確定此化合物適宜作為crs用時，須采用適當的儀器給出恰當的數值。

1．4  用于評價crs的物理化學方法

確定某種化合物是否適宜作crs用，就要建立相應的檢測方法。所用的方法分為2類：鑒別方法和測定純度的方法。就大多數方法而言，即或沒有鑒別出雜質，此化合物的純度也不能以數值表示，實驗報告給出的數值是基于不同實驗方法數據得出的近似值。

當鑒定某種化合物是否可以作為crs時，分子結構已確定，則可以通過與化合物紅外譜圖的比較來確認，但對有多種構型存在的應加以注意；也應比較其它譜圖，如核磁共振、質譜、