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典型的G蛋白偶聯(lián)受體傳遞信號的基本原理是：特異性的配體結(jié)合到相應(yīng)的7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）上，引起GPCR構(gòu)象的變化；構(gòu)象變化之后的GPCR能夠結(jié)合相應(yīng)的GDP結(jié)合狀態(tài)的三聚體G蛋白，并誘導(dǎo)三聚體的Ga亞基構(gòu)象發(fā)生變化，釋放結(jié)合的GDP。處于空置狀態(tài)的Ga 亞基迅速與周圍環(huán)境中的GTP結(jié)合。結(jié)合了GTP的Ga亞基立即與GPCR和Gbg亞基復(fù)合物分離（如圖）。自由的Ga 亞基和Gbg亞基分別與下游的效應(yīng)蛋白結(jié)合，通過調(diào)控效應(yīng)蛋白的活性來實現(xiàn)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ga亞基在同效應(yīng)蛋白結(jié)合的同時或者之后，水解結(jié)合的GTP成為GDP，于是Ga亞基在自身的調(diào)節(jié)下關(guān)閉功能，回到非活性的GDP結(jié)合狀態(tài)，并與Gbg 亞基形成三聚體，等待下一次信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

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什么是單克0隆抗0體？

單克0隆抗0體(MAb)，是針專一的抗原決定簇產(chǎn)生的抗0體，單克0隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗0體的B細胞與腫0瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞，生產(chǎn)抗0體。

單克0隆抗0體制備的原理是什么？

要制備單克0隆抗0體需先獲得能合成專一性抗0體的單克0隆B淋巴細胞，但這種B淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發(fā)現(xiàn)骨0髓瘤細胞可在體外生長繁殖，應(yīng)用細胞雜交技術(shù)使骨0髓瘤細胞與免0疫的淋巴細胞二者合二為一，得到雜0種的骨0髓瘤細胞。這種雜0種細胞繼承兩種親代細胞的特性，它既具有B淋巴細胞合成專一抗0體的特性，也有骨0髓瘤細胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性，用這種來源于單個融合細胞培養(yǎng)增殖的細胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克0隆抗0體。

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水佐劑免0疫步驟

步驟一：用生理鹽水將抗原稀釋到2倍zui終濃度。備注：推薦使用的抗原用量為（1）免0疫原性較弱的亞單位蛋白每針次1~50μg（通常為10~20μg）；（2）免0疫原性較強的滅活全病毒和病毒樣顆粒每針次0.1~10μg（通常為1~2μg）。

步驟二：充分混勻佐劑，無菌條件下取出所需量與抗原按體積比1:1迅速混勻。備注：本佐劑產(chǎn)生沉淀屬正?，F(xiàn)象，與抗原混合操作越快越好。

步驟三：通過后腿小腿肌肉注0射免0疫小鼠，每只小鼠100μl。備注：本佐劑與抗原混合后產(chǎn)生沉淀屬正常現(xiàn)象，抽入針管前應(yīng)充分混勻，抽入針管后應(yīng)盡快注0射。

步驟四：第21天按同樣方式加強免0疫一針。備注：每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。

步驟五、第35天采微量尾血進行ELISA測定，抗0體滴度應(yīng)在1:10000~1:10000000范圍內(nèi)，　隨后即可摘眼球采全血或進行脾細胞融合。備注：若極偶爾情況下抗0體滴度達不到實驗需求，可在第42天再按同樣方式加強免0疫一針。

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