北京/成都/重慶/武漢細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室污染空間環(huán)境滅菌辦法

細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物和不受其他有害因素的影響。為防止微生物污染和有害因素的影響，細(xì)胞培養(yǎng)室要求環(huán)境清潔，空氣清新、干燥、無塵。對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行定期清潔、使用高效型消毒劑是避免細(xì)胞培養(yǎng)過程中由于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境引起細(xì)胞污染的主要措施。

對于細(xì)胞培養(yǎng)，污染是Zui大的敵人，不管是設(shè)備、試劑亦或是環(huán)境造成的污染，這是每個(gè)養(yǎng)細(xì)胞的同志所頭疼的事情。

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染，主要包括細(xì)菌芽孢污染、霉菌污染、支原體污染、噬菌體污染等。今天主要講一下噬菌體污染。

噬菌體是一種寄生于細(xì)菌上的病毒，可以感染并破壞細(xì)菌。噬菌體污染會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，影響實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。此外，噬菌體污染還可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤解和實(shí)驗(yàn)人員的健康威脅。

噬菌體的危害

噬菌現(xiàn)象：液體培養(yǎng)基溶氧急劇上升，產(chǎn)生大量氣泡，在較短時(shí)間內(nèi)菌體大量自溶，發(fā)酵液Zui終變清。固體培養(yǎng)基出現(xiàn)噬菌斑。

利用細(xì)菌或放線菌進(jìn)行的發(fā)酵容易受噬菌體的污染，由于噬菌體的感染力非常強(qiáng)，傳播蔓延迅速，且較難防治，對發(fā)酵生產(chǎn)有很大的威脅。一旦發(fā)生噬菌體污染，會導(dǎo)致發(fā)酵異常、倒罐,使工業(yè)生產(chǎn)遭到嚴(yán)重?fù)p失。

噬菌體的防治措施

1.外來可疑菌種一律不做增殖。

2.多菌種交替使用，采用抗噬菌體的感受態(tài)。

3.劃分大腸桿菌的操作區(qū)域，接種區(qū)，發(fā)酵區(qū)，收菌區(qū)，菌種保藏區(qū)要嚴(yán)格分開。

4.嚴(yán)禁活菌排放，廢菌高壓滅菌后方可傾倒。

5.規(guī)范操作，避免污染。

6.保證潔凈，干燥的工作環(huán)境。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中環(huán)境污染有哪些途徑？

1、取放細(xì)胞時(shí)引起的污染

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，取放細(xì)胞是Zui基本的操作，培養(yǎng)房開關(guān)門的瞬間，環(huán)境中的微生物或多或少會進(jìn)入培養(yǎng)箱中，而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生，極易吸附微生物，都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險(xiǎn)因素。

2、滅菌不徹底造成的二次污染

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，因其它操作問題（如培養(yǎng)基潑灑，水盤污染等），造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時(shí)常會發(fā)生，此時(shí)就需要對培養(yǎng)箱進(jìn)行滅菌消毒，常規(guī)的消毒（如紫外照射）只能達(dá)到表面消毒的效果，特別是對真菌等頑固性污染，無法進(jìn)行徹底滅菌，導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞污染頻發(fā)。

實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)消毒方式

在傳統(tǒng)的細(xì)胞房消毒方法中，Zui常用紫外線、高溫、酒精等消毒方式。

1、紫外線消毒

紫外線消毒是通過紫外線殺死或去除微生物。

優(yōu)勢：適合無遮擋敞開型環(huán)境和空氣消毒，能夠在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到殺菌效果。使用成本相對較低，由于不投加化學(xué)藥劑，不會對水和環(huán)境產(chǎn)生影響。

缺點(diǎn)：殺菌效力較低，無法殺滅霉菌（孢子）、芽孢等高抗性微生物。紫外線燈套容易結(jié)垢，需頻繁清洗以維持效果，另外紫外線存在老化問題，要求現(xiàn)場操作人員具備較高技術(shù)工藝，及時(shí)測定衰減程度并進(jìn)行校正或更換，無法達(dá)到可控、可計(jì)量的消毒標(biāo)準(zhǔn)。紫外線不能直接照射人體，所以只能在無人情況下使用。受空間環(huán)境因素制約，所以通常作為一種輔助性消毒措施。

2、高溫消毒

高溫消毒是通過高溫殺死或去除微生物。高溫消毒有很多優(yōu)點(diǎn)，例如能夠殺死微生物的內(nèi)部、不會產(chǎn)生化學(xué)殘留物等。但是，高溫消毒也有一些缺點(diǎn)。首先，高溫消毒需要使用高溫設(shè)備，這會增加成本。其次，高溫消毒需要一定的時(shí)間，因此需要進(jìn)行計(jì)劃和安排。Zui后，高溫消毒可能會對一些細(xì)胞培養(yǎng)物造成損傷。

3、酒精擦拭消毒

酒精擦拭消毒是常見的一種消毒方法，但酒精易揮發(fā)，不穩(wěn)定。只能用于物體表面消毒，其消毒主要針對普通細(xì)菌，對高抗性的芽孢、霉菌等無效。

70%-75%乙醇優(yōu)勢是對細(xì)菌具有較好的殺滅作用，但對真菌的效力有限，可以使用諾福消毒液來解決乙醇無法較好解決的酵母、霉菌、芽孢、噬菌體等污染問題。

對于各種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室來說，Zui重要的是杜絕一切可能的污染源，防范于未然。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體和噬菌體污染時(shí)，應(yīng)該采用有效的消毒方法進(jìn)行清理。西安克微生物專業(yè)解決細(xì)胞間支原體污染、真菌污染問題、噬菌體污染問題、黑膠蟲污染問題，治理經(jīng)驗(yàn)豐富，可提供上門消毒服務(wù)和指導(dǎo)。

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