是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結(jié)合化學發(fā)光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。

優(yōu)點

1 濕的固定化基質(zhì)膜柔韌, 易于操作；

2 固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近,不會象凝膠那樣受孔徑阻隔；

3 免疫印跡分析只需少量試劑；

4 孵育、洗滌的時間明顯減短；

5 可同時制作多個拷貝, 用于多種分析和鑒定；

6 結(jié)果以圖譜形式可長期保存；

7 免疫探針可通過降低PH值等方法, 象抹去錄音磁帶一樣將探針抹掉,再換用第二探針進行分析檢測。

關于蛋白免疫印跡，北京清析技術(shù)研究院可提供異常朊蛋白，甲胎蛋白變異體，兔骨組織總蛋白，大鼠肝組織中P-糖蛋白，上皮鈣粘蛋白，表面活性蛋白，蛋白抗體，病毒抗體，大鼠腦組織中P-糖蛋白，綿羊朊蛋白等檢測項目。

方法步驟

1.蛋白質(zhì)分離

首先，將待測樣品進行電泳分離。通常使用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）進行分離，根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小將其分離成不同的帶狀條帶。 

2.轉(zhuǎn)印

將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固定膜上。這個步驟通常使用西方半濕法或濕法轉(zhuǎn)印，將凝膠和膜夾在一起，通過電流使蛋白質(zhì)從凝膠逐漸轉(zhuǎn)移到膜上。 

3.阻斷

為了減少非特異性結(jié)合，需要用飽和蛋白或其他蛋白質(zhì)進行膜的阻斷。常見的阻斷劑包括牛血清白蛋白（BSA）或非脂干奶粉。 

4.抗體結(jié)合

將特異性的一抗加入到含有阻斷劑的緩沖液中，將膜與抗體溶液一同孵育，使抗體與目標蛋白質(zhì)結(jié)合。 

5.清洗

將膜用洗滌緩沖液洗滌，以去除未結(jié)合的抗體和其他非特異性的成分。 

6.檢測

將抗體標記物（如熒光素、辣根過氧化物酶等）加入到膜上，使其與結(jié)合的抗體發(fā)生特異性反應。通過熒光素的化學反應或辣根過氧化物酶底物的顯色反應來產(chǎn)生可見的信號。這些信號可以通過數(shù)字成像系統(tǒng)進行記錄和分析。 

檢測標準

1、SN/T 2206.7-2010化妝品微生物檢驗方法.第7部分:蛋白免疫印跡法檢測瘋牛病病原

2、GB/T 40225-2021 肌動蛋白抗體的檢測 免疫印跡法

3、GB/T 38477-2020 基因表達的測定 蛋白印跡法