產(chǎn)品詳情

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葡萄糖異構(gòu)酶

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

負(fù)氫離子轉(zhuǎn)移機(jī)制

晶體學(xué)和酶動(dòng)力學(xué)的證據(jù)表明，GI 是采用金屬離子介導(dǎo)的負(fù)氫離子轉(zhuǎn)移機(jī)制。關(guān)于負(fù)氫離子轉(zhuǎn)移中間體形式有兩種看法，一種是陽(yáng)離子形式，在異構(gòu)化過(guò)程中， Mg-2 極化底物C1 的羰基產(chǎn)生碳正離子， Mg-1 和K183作為路易斯酸穩(wěn)定碳正離子，同時(shí)兩個(gè)金屬離子穩(wěn)定O2 的負(fù)電荷 。另一種是陰離子形式，提出與底物的O1 、O2和D257的羧基形成氫鍵并與催化離子Mn2+配位的水分子，將質(zhì)子轉(zhuǎn)移給D257 的CO1而自身形成OH-離子，此OH-離子奪取底物的質(zhì)子使其帶負(fù)電荷，其質(zhì)子轉(zhuǎn)移是由水分子氫氧根離子完成的 [1]  。

HFCS制備

HFCS的工業(yè)化生產(chǎn)中的α－淀粉酶、β－糖苷酶價(jià)格相對(duì)較便宜，而GI生產(chǎn)成本較高，是生產(chǎn)HFCSZui關(guān)鍵的一步，直接影響HFCS的產(chǎn)量和生產(chǎn)成本，因此GI的生產(chǎn)成本對(duì)HFCS的生產(chǎn)具有重要意義。目前報(bào)道的商業(yè)化產(chǎn)生菌的酶產(chǎn)量在1000～35000UL-1，因此，篩選更優(yōu)良的GI、改善GI的催化性能和工藝條件以提高轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量是生產(chǎn)HFCS的重要發(fā)展趨勢(shì)[5]  。如耐高溫GI、　耐酸性GI、對(duì)底物親和力提高的GI、對(duì)金屬離子依賴性改變的GI、對(duì)抑制劑不敏感的GI。

固定化

為了增加GI應(yīng)用于催化反應(yīng)的批次，降低HFCS的生產(chǎn)成本，工業(yè)上一般采用固定化游離GI或產(chǎn)GI的微生物細(xì)胞的方法進(jìn)行HFCS的生產(chǎn)。國(guó)外在GI固定化方面的研究較早，技術(shù)較成熟。20世紀(jì)70年代，通過(guò)交聯(lián)、吸附和包埋等固定化技術(shù)實(shí)現(xiàn)了6種GI的固定化，并商業(yè)化出售。如杰能科公司生產(chǎn)的IGI是通過(guò)聚乙烯亞胺戊二醛交聯(lián)GI產(chǎn)生菌的細(xì)胞，并添加無(wú)機(jī)載體膨潤(rùn)土、硅藻土混合制得，固定化后的GI穩(wěn)定性極好，在60℃的填充床反應(yīng)器中的半衰期達(dá)到一年以上[5]  。

國(guó)內(nèi)有關(guān)GI固定化的研究也較多，但穩(wěn)定性和酶活力方面仍低于國(guó)外水平。鄧輝等 [6] 采用殼聚糖絮凝和戊二醛交聯(lián)的方法，對(duì)表達(dá)生產(chǎn)褐色嗜熱裂孢菌GI的重組大腸桿菌進(jìn)行固定化，使固定化的酶活力達(dá)到356U·

g-1，半衰期達(dá)到61天，基本滿足HFCS的工業(yè)生產(chǎn)要求。