產(chǎn)品簡(jiǎn)介

本品為使用大腸桿菌DH10B菌株制備的高效化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/μg DNA，被廣泛用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、基因克隆等；可以使用藍(lán)白斑篩選。

產(chǎn)品組成

基因型：F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galKλ- rpsL nupG

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20℃或者液氮中保存。

產(chǎn)品特性

-來源于MC1061菌株，可用于基因克隆等；

-rpsL突變賦予DH10B菌株鏈霉素抗性；

-藍(lán)白斑篩選時(shí)，需在平板上預(yù)先涂布IPTG和X-gal；

-mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA；

-由于recA1和endA1的突變，因此該菌株的重組率較低，有利于插入DNA的穩(wěn)定，故常用于克隆質(zhì)粒的保存和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒DNA殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化DNA加入到100μL感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30min；

3. 將離心管置于42℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激90s后，立刻置于冰水浴中靜置2-3min；

4. 向離心管中加入900μL LB或SOC培養(yǎng)基（室溫或37℃預(yù)熱），然后置于37℃搖床復(fù)壯45min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化DNA的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10；

3. 加入待轉(zhuǎn)化DNA后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保Zui高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。